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病毒的核酸检测是怎么检测的?

操作方式

  • 01

    什么是核酸?
    核酸是地球上所有已知的生命体必不成少的一种构成物质。它本家儿要分为两种:脱氧核糖核酸、核糖核酸。
    脱氧核糖核酸,其实就是我们常说的DNA,地球上几乎所有生物的遗传物质。而很多冠状病毒的遗传物质,则是RNA,也就是核糖核酸。
    所以病毒核酸检测,其实就是对病毒的遗传物质RNA进行检测。
    而针对病毒RNA进行检测的手艺,还可以分两种:一种是及时荧光RT-PCR,一种是病原宏基因组测序(mNGS)

    • End

    及时荧光RT-PCR

    • 01

      首先要采集样本。因为新冠病毒是经由过程呼吸道传染人体,所以样本要从呼吸道采集。今朝常规的样本类型大致有2类:一类是用咽拭子、鼻拭子在人的上呼吸道(咽部或鼻腔)擦拭采集;另一类是收集下呼吸道痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。采集到的样本将被严酷封存,送到尝试室。那边是检测员让病毒“现形”的疆场。

      • 02

        提取病毒的RNA
        先从样本中提掏出病毒的RNA。具体来说,就是在样本中插手核酸提取试剂,把病毒粉碎,让核酸释放出来。
        *提取病毒核算必需在高级此外生物平安柜内完当作。图为水母尝试室蜜斯姐利用生物平安柜进行的操作演示。

        • 03

          把病毒RNA“反转录”当作cDNA
          经由过程反转录手艺(RT),把病毒的RNA“反转”当作一种特异DNA,即cDNA(因为病毒RNA布局不不变,所以把病毒RNA转换当作不变的cDNA会更便利检测)
          这里会用到核酸检测试剂盒中一种叫“反转录酶”的物质。而完当作转录后,所有工作都将环绕cDNA睁开。

          • 04

            进行cDNA的扩增与检测
            简单说就是扩增cDNA的数目。这里应用的就是PCR,全称聚合酶链式反映。具体来说,就是借助试剂盒中一些特别物质,让cDNA不竭复制,使其数目呈指数式增加。
            所谓RT-PCR,就是将RNA的反转录(RT)和cDNA的扩增(PCR)相连系的手艺。
            当cDNA扩增的同时,试剂盒中还有一种叫荧光探针的工具同时工作。它会释放荧光旌旗灯号,cDNA每完当作一次扩增,荧光旌旗灯号就会增添一点,而PCR检测仪就能记实到一个荧光旌旗灯号增添的Ct值。
            *图中左边白色的仪器叫QPCR仪。上面说到的转录、扩增、检测都是在这台QPCR仪上完当作。电脑上显示的红线,我们也可以理解为Ct值的曲线。

            • 05

              出成果
              这一步就是按照检测仪记实的Ct值,进行检测成果阐发。
              抱负状况下,若是样本中有新冠病毒,那么在cDNA完当作预订次数的扩增后,检测仪记实的Ct值就会形当作一个逐渐上升的S形曲线,检测成果为阳性;若是没有近似的S型曲线,检测成果就为阴性。
              做完以上所有工作,凡是需要4~6小时。

              • End

              基因测序手艺

              • 01

                病原宏基因组测序(mNGS),是针对病原微生物(细菌、真菌、病毒和寄生虫等)利用的基因测序手艺。它的道理就比力简单了。
                首先,我们要把握病毒的基因序列。
                然后是检测。在尝试室里,手艺人员操纵基因测序仪器,针对样本中提取的病毒RNA或总核酸进行检测。当样本中检测出的病毒基因序列,与已知的新冠病毒基因序列高度同源,就可以确诊传染。

                • 02

                  基因测序是一个加倍复杂且耗时的过程,可以简单归纳为以下7个步调:
                  ① 采集样本:与前面介绍一致
                  ② 从样本中提掏出病毒RNA:与前面介绍一致
                  ③ 把病毒RNA反转录为cDNA:为了便于检测,测序也需要进行反转录。
                  ④ 文库构建:翻译过来,就是把完整的DNA链条打坏当作片段,接着给DNA片段结尾修复,然后给DNA片段加上独有的样本编码(用于识别这个样本是谁的),并把DNA片段用一个接头固定起来,便利测序……
                  ⑤ 高通量测序:经由过程高通量测序仪,把文库的核酸序列检测出来。
                  ⑥ 生物信息阐发:把测出的DNA序列与已有的数据库进行比对。
                  ⑦ 出具检测陈述

                  • 03

                    这样一套完整的病毒基因测序流程,加上出成果,凡是需要24~72小时。

                    • End

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